O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência do sistema automatizado (curva de resfriamento controlada eletronicamente) de congelação de sêmen bovino versus o sistema convencional (curva não controlada) por meio dos parâmetros de qualidade e viabilidade espermática no período pós-descongelação. O sêmen de quatro touros azebuados adultos foram criopreservados simultaneamente em meio tris, gema e glicerol 7%. A avaliação computadorizada do sêmen descongelado detectou os seguintes parâmetros: MP 56,50±22,25%; VAP 34,77±4,25µm/s; VSL 28,17±4,25 µm/s; VCL 58,45±6,85µm/s; STR 82,00±2,31%; LIN 49,50±3,32%, para o sistema automatizado e MP. 57,00±13,11%; VAP 25,75±1,66µm/s; VSL 23,32±1,99µm/s; VCL 63,32±1,79µm/s; STR 82,25±3,59µm/s; LIN 50,00±4,97µm/s para o sistema convencional. Os valores médios das avaliações de integridade de membrana plasmática e integridade acrossomal foram de 54,72±12,55% e 36,13±22,20% para o sistema automatizado e 53,22±13,22% e 47,26±5,74% para o sistema convencional, respectivamente. Com os parâmetros avaliados foi possível identificar que não houve diferença estatística entre os sistemas de criopreservação. Desta forma, a escolha do método de criopreservação do sêmen bovino para utilização direta na propriedade fica a critério do técnico responsável, que deverá se basear na realidade de cada propriedade. Para tanto, sempre se deve considerar que o sistema convencional pode trazer mais variações que o sistema automatizado que, apesar do custo do equipamento, pode garantir repetibilidade nos resultados e consequente qualidade do sêmen bovino criopreservado.

The objective of this study was to compare the efficiency of bovine semen cryopreservation using the controlled-rate freezing machine versus the conventional method (uncontrolled curve) by the parameters of sperm quality and viability in post-thaw period. Semen from four adult crossbreed bulls was cryopreserved in Tris-yolk-glycerol medium. The computer assisted analysis of thawed semen detected the following results: PM 56.50±22.25%; VAP 34.77±4.25µm/s; VSL 28.17±4.25µm/s; VCL 58.45±6.85µm/s; STR 82.00±2.31%; LIN 49.50±3.32%, to automated system and PM 57.00±13.11%; VAP 25.75±1.66µm/s; VSL 23.32±1.99µm/s; VCL 63.32±1.79µm/s; STR 82.25±3.59µm/s; LIN 50.00±4.97µm/s to conventional cryopreservation system. The results of plasma membrane and acrosome integrity evaluation were 54.7±12.55% and 36.13±22.20% for the automated system and 53.22±13.22% and 47.26±5.74% for the conventional system, respectively. The parameters evaluated demonstrated that there was no statistical difference between the cryopreservation systems. Thus, the choice of the bovine semen cryopreservation method to be used on a farm is a responsibility of the technician, and should be based on the reality of each farm. Therefore, it is always necessary to consider that the conventional system of bovine semen cryopreservation can vary more than the automated system, which, despite the cost of the equipment, can ensure repeatability of the results and consequent quality of cryopreserved bovine semen.

O objetivo deste estudo foi comparar a cinética de sêmen bovino criopreservado não sexado, sexado X e sexado Y antes e depois da seleção espermática por gradiente de Percoll. Amostras criopreservadas de sêmen não sexado (grupo NS) e sexado X (grupo SX) e Y (grupo SY) por citometria de fluxo, de quatro touros, foram avaliadas quanto à motilidade e à cinética espermática com o "computer-assisted semen analysis" (CASA) e o restante da amostra de cada grupo foi submetido à seleção espermática em gradiente de Percoll (45:60%). Após a seleção, foram realizadas as mesmas avaliações que antes da passagem pelo Percoll. A motilidade do grupo NS foi superior à dos grupos SX e SY e não foi observada diferença entre os grupos SX e SY nos parâmetros de cinética espermática obtidos pelo CASA, antes ou após a passagem pelo Percoll. Foi observado aumento na motilidade para todos os grupos como efeito da seleção pelo Percoll. O processo de sexagem por citometria de fluxo afeta a cinética espermática, e a passagem pelo Percoll aumenta a motilidade do sêmen sexado e não sexado sem alterar a cinética do sêmen não sexado.

The objective of this study was to compare the kinetics of bovine cryopreserved nonsexed, sexed for X and sexed for Y sperm cells before and after selection using Percoll gradient. Cryopreserved nonsexed (NS group) semen samples and sexed for X (SX group) and for Y (SY group) by flow cytometry, from four different sires, were analyzed for motility by computer-assisted semen analysis (CASA), and the remainder of the sperm samples for each group was submitted to Percoll (45:60%) gradient selection. After Percoll selection, the same sperm analyses done before the passing through Percoll gradient were performed. Sperm motility was higher in the NS group than in the SX and SY groups, and no differences were observed between these last two groups for any of the sperm parameters evaluated by CASA, either before or after Percoll selection. Percoll increased motility for all groups. Changes in other characteristics evaluated by CASA were observed only in the NS group. Sex-sorting procedure by flow cytometry affected sperm kinetics, and Percoll gradient selection increases motility in sexed and nonsexed sperm without affecting the kinetics of nonsexed sperm.

O presente estudo avaliou o efeito da presença do líquido folicular e hormônios durante a maturação nuclear e citoplasmática em ovócitos suínos. Para avaliar o efeito do líquido folicular, os oócitos foram maturados in vitro em TCM-199 na presença de hormônios, em que o meio foi suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 10% de líquido folicular de folículos grandes (l-pFF), 10% de líquido folicular de folículos médios (m-pFF) ou nenhum suplemento. Quando os oócitos foram maturados no meio contendo hormônios, a adição de diferentes suplementos não afetou (P<0,05) a maturação nuclear. Entretanto, mudanças no suplemento provocaram uma alteração na maturação citoplasmática, sendo que as maiores taxas (P<0,05) foram observadas no grupo com l-pFF. Para determinar o efeito da presença de hormônios e/ou suplemento durante a maturação, os oócitos foram cultivados em TCM-199, TCM-199 com hormônios, TCM-199 com 10% l-pFF ou TCM-199 com hormônio e 10% l-pFF. A maior proporção de oócitos que sofreram maturação nuclear e citoplasmática ocorreu no grupo em que ambos, hormônios e líquido folicular, estavam presentes. A expansão do cumulus influenciou (P<0,05) na maturação citoplasmática, sendo que os oócitos sem expansão apresentaram menor taxa de maturação em todos os grupos. Quando diferentes concentrações de gonadotrofinas foram utilizadas durante a maturação, não foi observado nenhum efeito na maturação nuclear ou citoplasmática. Os resultados deste estudo sugerem que as mudanças na composição do meio podem afetar as taxas de maturação, sendo que o líquido folicular, combinado com hormônios, proporciona as melhores condições para maturação de oócitos suínos.

To evaluate the effect of follicular fluid on in vitro maturation, pig oocytes were cultured in the presence of hormones where 10% of fetal calf serum (FCS), 10% of follicular fluid from large follicles (l-pFF), 10% of follicular fluid from medium follicles (m-pFF) or no supplement were added. When oocytes where matured in medium containing the hormones the addition of different supplements did not affect (P<0.05) nuclear maturation. However, changing the supplement altered the cytoplasmic maturation, with higher rate (P<0.05) observed in the l-pFF group. To determine the effect of the presence of hormone and/or supplement during maturation, the oocytes were cultured either in presence of TCM-199 alone, with hormones, with 10% l-pFF or with hormones and 10% l-pFF. The highest proportion of oocytes undergoing nuclear and cytoplasmic maturation was obtained when both hormones and follicular fluid were present. Cumulus expansion had a significant (P<0.05) effect on cytoplasmic maturation with the non-expanded groups showing a lower percentage of maturation in all groups. When the adequacy of gonadotropins levels were evaluated by adding higher or lower concentrations into the maturation medium neither beneficial nor detrimental effects were observed in either nuclear or cytoplasmic maturation. These results suggest that changes in the composition of the medium can alter the percentage of oocytes completing maturation. Follicular fluid combined with hormones was found to give better conditions for pig oocyte maturation in vitro.

Verificou-se o efeito de duas distintas estações do ano (seca e chuvosa) sobre algumas características ovarianas em vacas Bos indicus abatidas na região de Campo Grande, MS. Ovários (n = 10) foram obtidos nos meses de novembro e dezembro de 1998 e de janeiro a outubro de 1999. No laboratório, os ovários foram avaliados quanto ao peso (g), volume (Vol. (cm³) = 3/4 p x comprimento/2 x largura/2 x espessura/2), número de corpos lúteos, número de folículos com > 9 mm de diâmetro, número total de folículos com menos de 9 mm, número de oócitos, oócitos viáveis e oócitos degenerados. O efeito principal da estação (seca ou chuvosa) foi estimado pela análise de variância (teste t), para modelos completamente ao acaso. Utilizou-se a análise da correlação simples entre as variáveis estudadas, ajustadas para o efeito da estação. Os resultados revelaram que o peso dos ovários (5,1 x 6,5 g), folículos totais (10,1 x 13,7), corpos lúteos (0,32 x 0,47, p < 0,05) e a percentagem de oócitos viáveis (19,6% x 35,6%) sobre o total de oócitos variaram significativamente (p < 0,01) entre as estações seca e chuvosa, respectivamente. A análise da correlação (r) mostrou coeficientes significativos (p < 0,01) entre peso e volume (r = 0,78), peso e total de folículos (r = 0,32), peso e corpos lúteos (r = 0,41), total de folículos e oócitos viáveis (r = 57), entre outros. Concluiu-se que importantes modificações na função ovariana, com base na produção e qualidade dos oócitos, podem ser estimadas entre a estação seca e chuvosa. Com base nestas características, a estação chuvosa torna-se mais favorável para a implantação de programas reprodutivos em rebanhos comerciais.

The present study evaluated the effect of two seasons of the year (dry and rainy) on the ovarian characteristics of Bos indicus slaughter cows in Mato Grosso do Sul, Brazil. Ovaries (n = 10) were collected on November and December of 1998 and from January to October of 1999. In the laboratory the ovaries were evaluated for weight (g), volume (Vol. (cm³) = 3/4 p x length /2 x width/2 x thickness/2), number of corpus luteum, number of follicles > 9 mm of diameter, total number of follicles < 9 mm, number of oocytes viable and degenerated. The main effect of the season (dry or rainy) was estimated by analysis of variance (t test), for completely randomized design. Analysis of simple correlation (Sperman rank correlations) was performed among the variables studied, which were adjusted for the season effect. The results demonstrated that the effect of ovaries weight (5.1 x 6.5 g), total follicles (10.1 x 13.7), corpus luteum (0.32 x 0.47, p < 0.05) and the frequency of viable oocytes (19.6% x 35.6%) on the total oocytes recovered varied significantly (p < 0.01) between the dry and rainy season, respectively. Correlation analysis (r) showed significant coefficients (p < 0.01) between weight and volume of the ovaries (r = 0.78), weight and total follicles (r = 0.32), weight and corpus luteum (r = 0.41), total follicles and viable oocytes (r = 57), among others. It is concluded that important changes in ovarian function, based on the production and quality of oocytes, can be estimated between the dry and the rainy season. Therefore, based on those characteristics, the rainy season is the most appropriate for implantation of reproductive programs in commercial herds.

Este estudo avaliou o efeito do tamanho do folículo na capacidade dos ovócitos de sofrerem maturação nuclear e citoplasmática. Ovários de vacas Nelore (Bos indicus) foram coletados logo após o abate, e os complexos cúmulus-ovócitos foram aspirados de folículos de diferentes categorias, e classificados de acordo com seus diâmetros em: 1-2 mm, 3-5 mm, 6-8 mm e > ou = 9 mm. A medida do diâmetro e a fixação dos ovócitos para avaliação do estádio nuclear antes da maturação foram feitas logo após a aspiração. Ovócitos morfologicamente viáveis foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Os ovócitos obtidos de folículos de 1-2 mm apresentaram menor diâmetro (P<0,01) do que os dos demais grupos. Antes da maturação, 89,8%, 90,1%, 85,7% e 100% dos ovócitos provenientes de folículos de 1-2, 3-5, 6-8 e > ou = 9 mm de diâmetro, respectivamente, apresentavam vesícula germinativa. O tamanho do folículo não influenciou (P<0,05) a taxa de maturação nuclear. A porcentagem de ovócitos que chegaram a metáfase II foi de 88,8%, 87,8%, 92,9% e 100% no que se refere aos ovócitos de folículos de 1-2, 3-5, 6-8 e > ou = 9 mm, respectivamente. As taxas de penetração e clivagem foram semelhantes (P>0,05) nos grupos de 1-2 mm (93,4% e 81,9%), 3-5 mm (90,7% e 79,6%), 6-8 mm (91,3% e 77,8%) e > ou = 9 mm (92,0% e 78,3%). Da mesma forma, não houve diferenças (P>0,05) entre as categorias de folículos no que se refere às taxas de polispermia, descondensação da cabeça do espermatozóide e formação de pro-núcleos. Os resultados deste estudo demonstram que na espécie B. indicus, folículos com diâmetro de 1 mm até > ou = 9 mm não influenciaram a capacidade dos ovócitos de reiniciar e completar a meiose e de clivar após maturação e fecundação in vitro.

The objective of this study was to investigate the effect of follicle size on the ability of the oocytes to undergo nuclear and cytoplasmic maturation. Ovaries from Nelore cows (Bos indicus) were collected just after slaughter. The cumulus oocyte complexes were aspirated from four size categories follicles: 1-2 mm, 3-5 mm, 6-8 mm and > or = 9 mm of diameter. The oocytes were measured and evaluated for chromatin configuration before maturation. After selection the oocytes were matured, fertilized and cultured in vitro. Oocytes obtained from follicles of 1-2 mm showed a smaller diameter (P<0.01) than the other follicle groups. Before maturation 89.8%, 90.1%, 85.7% and 100% of oocytes from follicles of 1-2 mm, 3-5 mm, 6-8 mm and >9 mm, respectively, showed a germinal vesicle. A similar maturation rate (P<0.05) was observed for all groups, with 88.8%, 87.8%, 92.9% and 100.0% of the oocytes in metaphase II for follicles of 1-2, 3-5, 6-8 and >9 mm, respectively. The penetration and clivage rates were also similar (P>0.05) for oocytes obtained from follicle of 1-2 mm (93.4% and 81.9%), 3-5 mm (90.7% and 79.6%), 6-8 mm (91.3% and 77.8%) and > or = 9 mm (92.0% and 78.3%). In addition, there were no differences (P>0.05) among follicles groups on the percentage of oocytes showing polispermy, decondensed sperm head and pronuclei formation. The results of this experiment showed that oocytes obtained from 1-2 mm to > or = 9 mm follicles, from Bos indicus, have similar capability to undergo in vitro maturation and fertilization as the larger follicles.